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[0003] 着色剂按照性能和着色方式可分为染料和颜料两大类，染料又分为天然染料和合 成染料，颜料则分为无机颜料和有机颜料。按照来源方式，可分为天然着色剂和合成着色 剂两大类。其中天然染料和无机颜料一般属于天然着色剂，合成着色剂则包括合成染料及 有机颜料。大多数的合成着色剂多来自煤焦油产物，往往会对人体造成不同程度的危害，例 如，导致生育能力下降、畸胎，甚至诱发癌症，一些合成色素可引起光敏反应。目前，化妆品 对于一些人而言已成为生活必需品，为安全起见，世界上许多国家均对化妆品用着色剂作 了相关规定。我国《化妆品卫生规范》（2007)参照《欧盟化妆品规程》并结合中国的特点， 对化妆品用着色剂的品种、使用范围和限制条件都做出了明确的规定。
[0008] 在检测标准领域，目前化妆品着色剂检测尚无任何现行的国家标准。国标计划 20090914-T-607《化妆品中罗丹明B等4种禁用着色剂的测定高效液相色谱法》，涉及4种 禁用着色剂，目前处于标准报批阶段，尚未正式发布。国家食品药品监督管理局发布化妆品 检测方法中，国食药监保化[2012] 13号附件15方法，涉及5种禁用着色剂(酸性黄36(C. I. 13065)、颜料橙 5 (C.I. 12075)、颜料红 53:1 (C.I. 15585:1)、苏丹红 II(C.I. 12140)和 苏丹红IV(C. I. 26105))。通过文献研究发现，现有检测方法和手段很难满足目前化妆品领 域对禁用着色剂使用安全的质量监管要求。化妆品中禁用着色剂多组分检测尚存在很大的 研究空白。这使得化妆品尤其是彩妆类化妆品的质量安全引发社会的广泛关注。为此，力口 快化妆品中禁用着色剂的检测方法开发，满足日益增长的化妆品安全监管需要，意义尤为 重大。
[0010] 本发明的化妆品中14种禁用着色剂同时检测的方法，所述的着色剂为：吖啶黄、 溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、氯化五甲基 副玫瑰苯胺、苏丹红II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红IV、罗丹明B、分散黄3、苏丹I ;其 特征在于：检测步骤如下： (1) 盐溶液的配制 将醋酸铵加入到甲醇和水的混合溶液中，甲醇与水的体积比为1 : 1，醋酸铵充分溶解 后得甲醇-水醋酸铵溶液，醋酸铵浓度为50 ~250 mmol/L ; 将醋酸铵加入到水中充分溶解，制得浓度为10?50 mmol/L的醋酸铵溶液； (2) 标准溶液的配制 分别等量称取吖啶黄、溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料 橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、苏丹红II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红IV、罗 丹明B、分散黄3、苏丹I并置于同一容量瓶中，用体积比为1 : 1的甲醇和四氢呋喃溶液充 分溶解并定容至刻线，配制成各目标物浓度均为20 μ g/mL的混合标准溶液，再用体积比 为1 : 1的甲醇和四氢呋喃溶液逐级稀释配制一系列各目标物浓度分别为5、2、1、0.5、0.2 μ g/mL的混合标准溶液，用于标准曲线) 样品溶液的制备： 称取待测化妆品样品置于离心管中，向离心管内加入四氢呋喃，待测化妆品与四氢呋 喃的用量比为0.2 g : 6 mL，涡旋并超声10 min，使样品分散或用80 °C水浴并适当加热 1~2 min，提取目标物，向离心管中加入第（1)步所得的甲醇-水醋酸铵溶液，四氢呋喃与甲 醇-水醋酸铵溶液的用量比为6 mL : 4 mL，使提取溶液定容至四氢呋喃与甲醇-水醋酸铵 溶液之和，涡旋混匀后超声10 min，然后于5000 r/min离心10 min;取澄清提取液，经0.45 μm微孔滤膜过滤后待测； (4) 液相色谱分析，参考条件如下： 色谱柱：P〇roshell 120 EC-C18,2.7ym，3.0 mmXlOO mm 或者相当者；柱温：35 °C ; 流速：0· 5 mL/min ;进样量：2 μ L ;用DAD检测器检测波长：416 nm、514 nm、590 nm ;流动 相：A为第（1)步制得的10?50 mmol/L醋酸铵溶液，B乙腈，梯度洗脱； (5) 质谱确证，参考条件如下： 液相色谱条件：色谱柱：P〇roshell 120 EC_C18,2.7 μηι，3·0 mmXlOO mm或者相当者； 流速：0. 5 μ L/min ;进样量：2 μ L ;流动相：A水相溶液，负模式为10mm〇l/L醋酸铵溶 液；正模式为〇. 33%。甲酸溶液，B有机相溶液，负模式为乙腈和甲醇，乙腈和甲醇的体积比 为6 : 4;正模式为乙腈，梯度洗脱； 质谱参考条件：离子源：电喷雾电离源（ESI源）;检测方式：多反应监测（MRM);雾化气： 氮气，35 Psi ;干燥气：氮气，流速10 L/min，温度：350 °C ;碰撞气：氮气；碰撞电压：380V ; 毛细管电压：4000 V ;其他质谱参数如下： 目标物的质谱分析参考参数
1. 一种化妆品中14种禁用着色剂同时检测的方法，所述的着色剂为：吖啶黄、溶剂蓝 35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰 苯胺、苏丹红II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红IV、罗丹明B、分散黄3、苏丹I ;其特征在 于：检测步骤如下： (1) 盐溶液的配制 将醋酸铵加入到甲醇和水的混合溶液中，甲醇与水的体积比为1 : 1，醋酸铵充分溶解 后得甲醇-水醋酸铵溶液，醋酸铵浓度为50 ~250 mmol/L ; 将醋酸铵加入到水中充分溶解，制得浓度为10?50 mmol/L的醋酸铵溶液； (2) 标准溶液的配制 分别等量称取吖啶黄、溶剂蓝35、溶剂红49、酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、颜料 橙5、颜料红53、氯化五甲基副玫瑰苯胺、苏丹红II、氯化六甲基副玫瑰苯胺、苏丹红IV、罗 丹明B、分散黄3、苏丹I并置于同一容量瓶中，用体积比为1 : 1的甲醇和四氢呋喃溶液充 分溶解并定容至刻线，配制成各目标物浓度均为20 μ g/mL的混合标准溶液，再用体积比 为1 : 1的甲醇和四氢呋喃溶液逐级稀释配制一系列各目标物浓度分别为5、2、1、0. 5、0. 2 μ g/mL的混合标准溶液，用于标准曲线) 样品溶液的制备： 称取待测化妆品样品置于离心管中，向离心管内加入四氢呋喃，待测化妆品与四氢呋 喃的用量比为0.2 g : 6 mL，涡旋并超声10 min，使样品分散或用80 °C水浴并适当加热 1~2 min，提取目标物，向离心管中加入第（1)步所得的甲醇-水醋酸铵溶液，四氢呋喃与甲 醇-水醋酸铵溶液的用量比为6 mL : 4 mL，使提取溶液定容至四氢呋喃与甲醇-水醋酸铵 溶液之和，涡旋混匀后超声10 min，然后于5000 r/min离心10 min;取澄清提取液，经0.45 μm微孔滤膜过滤后待测； (4) 液相色谱分析，参考条件如下： 色谱柱：P〇roshell 120 EC_C18,2.7ym，3.0 mmXlOO mm 或者相当者；柱温：35 °C ; 流速：0· 5 mL/min ;进样量：2 μ L ;用DAD检测器检测波长：416 nm、514 nm、590 nm ;流动 相：A为第（1)步制得的10?50 mmol/L醋酸铵溶液，B乙腈，梯度洗脱； (5) 质谱确证，参考条件如下： 液相色谱条件：色谱柱：P〇roshell 120 EC_C18,2.7 μηι，3·0 mmXlOO mm或者相当者； 流速：0. 5 μ L/min ;进样量：2 μ L ;流动相：A水相溶液，负模式为10mm〇l/L醋酸铵溶 液；正模式为〇. 33%。甲酸溶液，B有机相溶液，负模式为乙腈和甲醇，乙腈和甲醇的体积比 为6 : 4;正模式为乙腈，梯度洗脱； 质谱参考条件：离子源：电喷雾电离源（ESI源）;检测方式：多反应监测（MRM);雾化气： 氮气，35 Psi ;干燥气：氮气，流速10 L/min，温度：350 °C ;碰撞气：氮气；碰撞电压：380V ; 毛细管电压：4000 V ;其他质谱参数如下： 目标物的质谱分析参考参数
(6) 定性分析 分别将第（2)步取得的标准溶液和第（3)步取得的样品溶液按照第（4)步所述最优液 相分析参考条件进行分析，将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱 图与标准物质的液相色谱分离谱图进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的 保留时间一致的色谱峰，并且其扣除背景后的紫外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱 一致，则可初步认定样品中存在该物质；经液相色谱法确定为阳性的样品，必须经第（5)步 所述的质谱确证参考条件进行质谱分析进一步确证； (7) 定量测定 移取第（2)步系列标准溶液，按照第（4)步色谱条件进行高效液相色谱分析，以系列标 准溶液质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线 nm 下的紫外吸收进行定量计算，颜料红53、溶剂红49、颜料橙5、苏丹I、苏丹红II、苏丹红IV、 碱性紫10根据514 nm下的紫外吸收进行定量计算，酸性紫49、氯化四甲基副玫瑰苯胺、氯 化五甲基副玫瑰苯胺、氯化六甲基副玫瑰苯胺、溶剂蓝35根据590 nm下的紫外吸收进行定 量计算； 鉴于碱性紫10实为溶剂红49的盐酸盐，在本方法中与溶剂红49的出峰时间相同，方 法无法分辨是碱性紫10或溶剂红49。
